Université Paris-Sud Faculté de Pharmacie CNRS INSERM

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novembre 2022 | janvier 2023


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Equipements

La plateforme d’imagerie cellulaire MIPSIT met à la disposition de ses utilisateurs deux microscopes photoniques de haute résolution, un de super-résolution de type gated-STED (Stimulated Emission Depletion) et plusieurs postes de traitement et d’analyse de l’image.

MICROSCOPE CONFOCAL TCS SP8 – gated STED Leica

Microscope inversé DMI 6000 avec platine super Z-galvo
Détection spectrale

Lasers / Excitation
- Diode Laser 405 nm
- Blanc pulsé WLL (excitation possible de 470 à 670 nm)
- Laser de déplétion 592 nm pour la super-résolution (gated-STED)

Détecteurs
- Deux Hybrides GaAsP
- Deux PMTs
- Un PMT-trans

Objectifs
- HC PL Fluotar 10x/0.30 Sec
- HC PL APO 20x/0.75 CORR CS2 huile
- HC PL APO 40x/1.10 CORR CS2 eau
- HCX PL APO 100x/1.40 STED Huile

Dispositif d’incubation
Incubateur de platine OKOlab avec contrôleur de température, chambre thermostatée et objectif Heater

Logiciel d’acquisition
- LAS X
- Module FRAP
+ Logiciel de déconvolution pour les images STED (Huygens)

- Possibilité de télécharger gratuitement le LAS X Core Offline version :

[https://www.leica-microsystems.com/fr/produits/logiciel-du-microscope/informations-detaillees/product/show/Products/leica-las-x-ls/]
(lien en bas de leur page web)

Matériels complémentaires disponibles
- Chambres Attofluor cell chamber (Molecular Probes-Invitrogen)
- Mini-Poc chamber
- Incubateur à CO2 (NAPCO Model 5410)




MICROSCOPE CONFOCAL LSM 510 ZEISS® - META

Microscope inversé (Axiovert 100 M) avec platine motorisée xy.
Trois canaux de détection de la fluorescence dont un détecteur spectral META (8 canaux).


Lasers
- Argon multi-raies (458 / 488 / 514 nm) 30 mW.
- Hélium-néon 543 nm de 1mW.
- Hélium-néon 633 nm de 5 mW.

Objectifs
- Plan-Néofluar 10X / 0.30 Sec.
- Plan-Apochromat 20X / 0.75 Sec.
- C-Apochromat 40X / 1.20 Eau.
- Plan-Apochromat 63X / 1.40 Huile.
- Plan-Apochromat 100X/ 1.40 Huile.

- Système de contraste interférentiel différentiel (DIC) ou Nomarski sur tous les objectifs excepté le 10X.

Logiciel d’acquisition
- LSM 510 version 3.2.

- Possibilité de télécharger gratuitement le LSM Image Browser : http://www.zeiss.de/ImageBrowser

Matériels complémentaires
- Pour les études de processus dynamiques, nous disposons d’une platine chauffante (insert P).
- Chambre Attofluor cell chamber (Molecular Probes-Invitrogen).
- Mini-Poc chamber.
- Incubateur à CO2 (NAPCO Model 5410).
- Système de micro-injection Eppendorf (Transjector 5246).
- Système de perfusion 8 canaux (Harvard Apparatus –Warner inst.).



VIDEOMICROSCOPE AXIO-OBSERVER Z1 – COLIBRI® – TIRF 3

Système d’illumination
- COLIBRI : LED 365 nm, LED 470 nm, LED 555nm, LED 590 nm.
- Diodes laser (TIRF) : 488 nm (100mW), 561 nm (40mW).

Blocs filtres
- 49 DAPI : EX G 365, BS FT 395, EM BP 445/50 nm.
- 44 FITC : EX BP 475/40, BS FT 500, EM BP 530/50 nm (BP 505-555) nm.
- 43 Rhod : EX BP 550/25, BS FT 570, EM BP 605/70 nm (BP 570-640) nm.
- 61 HE GFP+HcRed : EM DBP 527/54 + 645/60 nm.
- 74 HE GFP+mRFP : EX DBP 480/30+565/25 ; BS DFT 505+583 ; EM DBP 525/31+616/57 nm.

Objectifs
- 10X / 0,25 Achroplan dt= 4,8 mm Sec
- 20X / 0,80 Plan-Apochromat dt = 0,55 mm Sec
- 20X LD /0,4 Plan-Neofluar dt = 0-1,5mm corr Ph2 Sec
- 40x LD /0,6 Plan-Neofluar dt = 0-1,5 mm Corr Ph2 Sec
- 63X / 1,40 Plan-Apochromat dt= 0,19 mm Huile
- alpha 100X / 1.46 Plan-Apochromat Huile pour TIRF

- DIC (contraste interférentiel différentiel) avec l’objectif 63X uniquement.

Caméras numériques
- sCMOS PRIME BSI : Photometrics, 2048 X 2048 pixels, taille du pixel : 6.5 X 6.5 µm, 16 bits.
- AxioCam HSm Zeiss® : Sony CCD, 660 X 494 pixels, taille du pixel : 9.9 X 9.9 µm, 12 bits.

Platine motorisée XY, Z piézo (ASI)

Dispositif d’incubation
- Incubateur XL S1 RED
- Insertion de chauffage P S1
- Unité chauffante XL S1
- Module TempModul S1
- Module régulateur de CO2 S1

Logiciel d’acquisition
- Zen Blue version 2.6 avec les modules suivants :
- Acquisitions Multicouleur, Z-stack, Time lapse, MosaiX, Mark and Find.



POSTES DE TRAITEMENT ET D’ANALYSE D’IMAGES

- LSM 510 v 3.2 et AxioVision v 4.8 off line.
- Zen Blue Lite
- LAS X offline (voir lien de téléchargement plus haut)

- Logiciels de déconvolution :
Autoquant X® ( Autodeblur, Autovisualize) www.aqi.com/.
Huygens déconvolution [https://svi.nl/HomePage]

- Image J®.
- Imaris 9.1.2 ( Imaris Measurement Pro + Imaris Track + Colocalization 3D) http://www.bitplane.com.
- GraphPad / Prism v.7